QUANTI-Blue™ 溶液是一種比色酶測(cè)定法，用于測(cè)定生物樣品（例如細(xì)胞培養(yǎng)上清液）中的任何堿性磷酸酶 (AP) 活性。它已優(yōu)化用于 96 孔板（標(biāo)準(zhǔn)程序）和 1536 孔板（高通量篩選程序）。 

QUANTI-Blue™ 解決方案可用于檢測(cè)和量化 AP 或 SEAP 活性。分泌型胚胎堿性磷酸酶(SEAP)，胎盤(pán)AP的截短形式，是廣泛使用的報(bào)告基因。SEAP 被分泌到細(xì)胞培養(yǎng)上清液中，因此提供了許多優(yōu)于細(xì)胞內(nèi)報(bào)告基因的優(yōu)勢(shì)。InvivoGen 提供了大量帶有 SEAP 報(bào)告基因的報(bào)告細(xì)胞系。

QUANTI-Blue™ 解決方案的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)：

• 一種檢測(cè)和量化 SEAP 和 AP 活動(dòng)的方便、簡(jiǎn)單和快速的方法

• 手動(dòng)操作時(shí)間短：< 10 分鐘

• 易于制備：只需將 QB 試劑和 QB 緩沖液與水混合

• 高度敏感

• 寬動(dòng)態(tài)范圍

• 高飽和閾值

• 允許進(jìn)行高通量篩選 (HTS)

在存在 AP 或 SEAP 的情況下，QUANTI-Blue™ 的顏色會(huì)從粉紅色變?yōu)樽仙?藍(lán)色。紫色/藍(lán)色強(qiáng)度反映了 AP 的活性。AP 的水平可以用肉眼定性測(cè)定或使用分光光度計(jì)在 620-655 nm 處定量測(cè)定。

圖

QUANTI-Blue™ 標(biāo)準(zhǔn)程序QUANTI-Blue™ 高通量篩選 (HTS) 程序

規(guī)格

物理化學(xué)特性：pH 值和溶解度

功能表征：使用表達(dá) SEAP 的報(bào)告細(xì)胞的堿性磷酸酶進(jìn)行細(xì)胞測(cè)定。

內(nèi)容

QUANTI-Blue™ 解決方案提供三種包裝尺寸：

• rep-qbs：5 x 1 ml QB 試劑 + 5 x 1 ml QB 緩沖液，足以為 25 x 96 孔板或 20 x 1536 孔板制備 QUANTI?Blue™ 溶液

• rep-qbs2：  10 x 1 ml QB 試劑 + 10 x 1 ml QB 緩沖液，足以為 50 x 96 孔板或 40 x 1536 孔板制備 QUANTI?Blue™ 溶液

• rep-qbs3：  1 x 20 ml QB 試劑 + 1 x 20 ml QB 緩沖液，足以為 100 x 96 孔板或 80 x 1536 孔板制備 QUANTI?Blue™ 溶液

 將 QB 試劑和 QB 緩沖液儲(chǔ)存在 -20°C。

重新配制的 QUANTI-Blue™ 溶液在 2-8°C 下可穩(wěn)定 2 周，在 -20°C 下可穩(wěn)定 2 個(gè)月。使重新配制的 QUANTI-Blue™ 遠(yuǎn)離光線。

細(xì)節(jié)

QUANTI-Blue™ 標(biāo)準(zhǔn)程序

1. 按照數(shù)據(jù)表上的說(shuō)明準(zhǔn)備 QUANTI-Blue™ 溶液。在 96 孔板的每孔中分配 180 μl QUANTI-Blue™ 溶液。

2. 將 20 μl 來(lái)自表達(dá) SEAP 的細(xì)胞的培養(yǎng)上清液添加到每個(gè)孔中。

3. 在 37°C 下孵育 15 分鐘至 6 小時(shí)后，使用酶標(biāo)儀測(cè)量 620-655 nm 處的光密度 (OD)