hti熒光底物

基于ANSN的植物基
的一般結(jié)構(gòu)舉例說(shuō)明了基于6-氨基-1-萘磺酰胺基（ANSN）的熒光基的一般結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明化合物家族中，R 1是三肽，其COOH-末端殘基通常是精氨酸。R 2和R 3可以是氫，烷基，芳基或環(huán)烷基。虛線表示各種絲氨酸蛋白酶的水解位點(diǎn)。

包含熒光報(bào)告基團(tuán)6-氨基-1-萘-磺酰胺（ANSN）的底物是用于監(jiān)測(cè)各種絲氨酸蛋白酶（1-12）的酶活性的有用化合物。在這類化合物中，ANSN報(bào)告基團(tuán)（在R1位置）連接至短三肽序列。設(shè)計(jì)肽序列以優(yōu)化酶和底物之間的相互作用?？梢蕴砑拥絉2和R3位置的其他組分反映了P'亞位位置的變化，并且通常影響底物的動(dòng)力學(xué)參數(shù)。有效底物的化合物在三肽和ANSN基團(tuán)之間水解。一旦從肽部分上切下，ANSN基團(tuán)的相對(duì)熒光顯示出約1000倍的增加。

下一頁(yè)確定的動(dòng)力學(xué)特性將有助于選擇合適的底物。事實(shí)證明，ANSN底物對(duì)因子VIIa（1-5,7,9,10,12）的分析特別有用。盡管僅因子VIIa的底物水解速率相對(duì)較慢，但將組織因子摻入測(cè)定系統(tǒng)后，幾種化合物（例如化合物SN-17a）的kcat表現(xiàn)出較大變化。

使用信息：
基于ANSN的底物在DMSO中以10mM的儲(chǔ)備溶液形式提供，通?？捎糜诜治?00 nM至50pM濃度范圍內(nèi)的酶。ANSN底物通常以50至100 µM的終濃度使用，并可以在大多數(shù)生理緩沖液（即TBS，HBS，PBS等）中稀釋至該終濃度。反應(yīng)（熒光的相對(duì)變化）可以使用標(biāo)準(zhǔn)熒光計(jì)或熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行監(jiān)測(cè)。動(dòng)力學(xué)或終點(diǎn)模式可與儀器一起在以下波長(zhǎng)下使用（激發(fā)= 352nm，發(fā)射= 470nm）。通過(guò)在發(fā)射光束中使用390至450 nm長(zhǎng)通截止濾光片，可以大程度地減少光偽影。

下表列出了每種底物的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，表格下方包括了一些期刊參考文獻(xiàn)以供使用。

DMSO中的底物儲(chǔ)備溶液應(yīng)在4°C或更低的溫度下冷凍保存，并避光。在這些條件下，這些化合物將保持穩(wěn)定超過(guò)一年。

**下表的關(guān)鍵字：K _m = µM；k _cat = s ^-1 ; k _cat / K _m = M ^-1 s ^-1 x 10 ^-5 ; ND =未確定

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  結(jié)構(gòu)體	D-AFK-ANSNH-iC 4 H 9 .2HBr
  對(duì)...有用	對(duì)纖溶酶有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	ND	ND	ND	ND	ND	ND	ND	130
  K 貓	ND	ND	ND	ND	ND	ND	ND	3.7
  鉀貓 / K M	ND	ND	ND	ND	ND	ND	ND	0.28

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   安全數(shù)據(jù)表

  結(jié)構(gòu)體	Mes-D-LGR-ANSN（C 2 H 5）2
  對(duì)...有用	對(duì)因子Xa有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	31	180	200	125	580	113	ND	ND
  K 貓	0.63	0.007	0.79	36	15	0.055	ND	ND
  鉀貓 / K M	0.2	ND	0.04	2.9	0.26	0.005	ND	ND

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   安全數(shù)據(jù)表

  結(jié)構(gòu)體	D-LPR-ANSNH-C 3 H 7 •2 HCl
  對(duì)...有用	對(duì)因子XIa有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	0.5	300	300	171	75	45	98	ND
  K 貓	19	0.07	4.5	3.3	53	52	0.31	ND
  鉀貓 / K M	380	0.002	0.15	0.19	7.1	12	0.03	ND

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   安全數(shù)據(jù)表

  結(jié)構(gòu)體	D-FPR-ANSNH-C 6 H 11 •2 HCl
  對(duì)...有用	對(duì)凝血酶和VIIa有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	0.4	150	330	150	ND	7.8	36	ND
  K 貓	17	0.05	8.4	0.32	ND	6.6	0.074	ND
  鉀貓 / K M	430	0.004	0.25	0.02	ND	8.6	0.02	ND

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   安全數(shù)據(jù)表

  結(jié)構(gòu)體	D-FPR-ANSNH-C 4 H 9 •2 HCl
  對(duì)...有用	對(duì)因子VIIa有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	ND	186	102	ND	ND	53	ND	ND
  K 貓	ND	0.11	2.7	ND	ND	21	ND	ND
  鉀貓 / K M	ND	0.006	0.26	ND	ND	4	ND	ND

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   安全數(shù)據(jù)表

  結(jié)構(gòu)體	Boc-L-（pF）FPR-ANSNH-C 2 H 5
  對(duì)...有用	對(duì)tPA有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	3.7	50	217	ND	ND	ND	71	ND
  K 貓	44	0.008	0.88	ND	ND	ND	1.03	ND
  鉀貓 / K M	120	0.002	0.04	ND	ND	ND	0.15	ND

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   安全數(shù)據(jù)表

  結(jié)構(gòu)體	Boc-L-FPR-ANSNH-C 2 H 5
  對(duì)...有用	對(duì)凝血酶有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	17	ND	ND	100	ND	540	47	ND
  K 貓	58	ND	ND	0.31	ND	2.2	0.011	ND
  鉀貓 / K M	34	ND	ND	0.003	ND	0.04	0.002	ND

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   安全數(shù)據(jù)表

  結(jié)構(gòu)體	L-EGR-ANSNH-C 3 H 7 •2 HBr
  對(duì)...有用	對(duì)因子XIa有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	100	ND	ND	110	225	440	ND	ND
  K 貓	2.5	ND	ND	0.2	82	17	ND	ND
  鉀貓 / K M	0.25	ND	ND	0.02	3.6	0.39	ND	ND

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   安全數(shù)據(jù)表

  結(jié)構(gòu)體	中銀D-VLR-ANSNH-C 4 H 9
  對(duì)...有用	對(duì)APC有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	19	42	170	19	ND	3.9	ND	ND
  K 貓	0.055	0.007	1.6	0.055	ND	2.1	ND	ND
  鉀貓 / K M	0.03	0.002	0.09	0.03	ND	5.2	ND	ND

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   安全數(shù)據(jù)表

  結(jié)構(gòu)體	D-VPR-ANSNH-C 4 H 9 •2 HCl
  對(duì)...有用	對(duì)凝血酶和aPC有用

  公式	二甲基亞砜
  濃度	10毫米

  動(dòng)力學(xué)性質(zhì)	a	VIIa	VIIa / TF	a	夏	電腦	噸PA	纖溶酶
  ? 中號(hào)	2	89	52	160	520	54	110	ND
  K 貓	110	0.019	0.76	3.3	92	72	0.71	ND
  鉀貓 / K M	550	0.002	0.14	0.21	1.8	13	0.065	ND