BioThema*專注于螢火蟲(chóng)熒光素酶反應(yīng)的分析應(yīng)用，無(wú)論是檢測(cè)細(xì)胞，測(cè)量酶活性還是其他東西。在該反應(yīng)中，用ATP（三磷酸腺苷）活化熒光素，然后氧化成氧化熒光素和CO 2。氧化熒光素以激發(fā)態(tài)形成，并在進(jìn)入其基態(tài)時(shí)發(fā)光。通常在所謂的發(fā)光計(jì)中測(cè)量光。
ATP + 熒光素+ O 2 -熒光素酶 - > AMP +焦磷酸+氧化熒光素+ CO 2 +光
在ATP的測(cè)定中，光發(fā)射可以基本上恒定或快速衰減。因此，基于螢火蟲(chóng)熒光素酶反應(yīng)，存在穩(wěn)定的光和閃光型ATP試劑。在熒光素酶水平低的情況下，每分鐘消耗的ATP比例可以忽略不計(jì)，然后光可以幾乎恒定但也很低。在高水平的熒光素酶下，ATP被消耗是不可避免的，導(dǎo)致光迅速減少，但初峰值光很高。實(shí)際上，峰高和衰減率都與熒光素酶活性成比例。BioThema開(kāi)發(fā)了三種ATP試劑
BioThema 266-111說(shuō)明書(shū)
SKU：266-111
該試劑盒的靈敏度允許在各種情況下測(cè)定低ATP水平，條件是降解體細(xì)胞中的ATP并不重要：
1。液體的細(xì)菌控制（例如飲用水，工藝用水，飲料和啤酒）
2。藥品和化妝品
3.細(xì)胞與表面的粘合
4.洗衣的質(zhì)量保證
5.細(xì)菌生長(zhǎng)。
6.對(duì)細(xì)菌的抗生素作用
該試劑盒用于測(cè)定活細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)ATP（三磷酸腺苷）。樣品中的細(xì)胞外ATP被酶促降解。如果樣品還含有體細(xì)胞并且目的是確定微生物ATP，我們建議使用266-112微生物ATP試劑盒，包括用于大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞裂解試劑。如果樣品中只有一種類型的細(xì)胞且沒(méi)有細(xì)胞外ATP，則可以使用266-311 ATP生物質(zhì)試劑盒。所有活細(xì)胞都含有ATP，它在不同細(xì)胞過(guò)程之間起著能量貨幣的作用。當(dāng)細(xì)胞死于自然原因時(shí)，ATP通常會(huì)降解。在所有類型的細(xì)胞中，小心地將ATP的細(xì)胞內(nèi)濃度調(diào)節(jié)至相似水平。因此，ATP是細(xì)胞內(nèi)總體積的良好估計(jì)。大多數(shù)細(xì)菌細(xì)胞含有大約。2×10-18 mol ATP /細(xì)胞，而大多數(shù)真核細(xì)胞由于其較大的尺寸，含有10-15 mol或更多的ATP。ATP生物質(zhì)試劑盒HS，細(xì)胞內(nèi)ATP試劑盒HS和微生物ATP試劑盒HS含有具有高熒光素酶活性的ATP試劑HS（高靈敏度）。ATP試劑HS中的熒光素酶活性實(shí)際上非常高，如果在重構(gòu)過(guò)程中受到污染，它將每38分鐘將ATP背景降低一個(gè)數(shù)量級(jí)。混合樣品和ATP試劑HS后，光強(qiáng)度衰減約。每分鐘6％。這足夠慢以允許手動(dòng)混合，并且可以使用沒(méi)有試劑分配器的管發(fā)光計(jì)。試劑的檢出限為10×10 -18使用靈敏的光度計(jì)測(cè)量ATP。這相當(dāng)于5個(gè)細(xì)菌細(xì)胞。我們必須在這里區(qū)分細(xì)菌細(xì)胞和CFU，因?yàn)橐粋€(gè)CFU可能由幾個(gè)細(xì)胞組成。如果檢測(cè)限不足，則可以通過(guò)微濾濃縮樣品，該過(guò)程也將除去大部分細(xì)胞外ATP。
可以使用任何管或微孔板發(fā)光計(jì)。應(yīng)該注意的是，管發(fā)光計(jì)比微孔板發(fā)光計(jì)靈敏度大約一個(gè)數(shù)量級(jí)。如果使用微孔板發(fā)光計(jì)，它應(yīng)該至少有兩個(gè)分配器，并且應(yīng)該能夠混合微孔板。
詳細(xì)描述的程序可在“使用說(shuō)明”中找到，該說(shuō)明書(shū)隨每個(gè)套件一起提供。
該試劑盒包含用于150-375測(cè)定的試劑（每個(gè)小瓶ATP試劑HS足以在管發(fā)光計(jì)中進(jìn)行25次測(cè)定，在微孔板發(fā)光計(jì)中進(jìn)行62.5次測(cè)定）。
檢測(cè)限：
使用靈敏的發(fā)光計(jì)1，試劑的檢出限為10×10-18 mol ATP 。
1 Lundin，A。（2000）在生物量，酶和代謝物的ATP相關(guān)測(cè)定中使用螢火蟲(chóng)熒光素酶。方法Enzymol。305,346-370。
2 Lundin，A。（1999）ATP檢測(cè)生物污染。在“30th R3-Nordic Contamination Control Symposium”（Eds.G.Wirtanen，S.Salo and A. Mikkola），VTT，Espoo，F(xiàn)inland，pp.337-352。
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